哪些因素會(huì)影響微滴式數(shù)字PCR儀的控制性能？

　　微滴式數(shù)字PCR儀是一種核酸檢測(cè)和定量分析的新方法，可以作為傳統(tǒng)實(shí)時(shí)定量PCR的替代方法，以實(shí)現(xiàn)一致定量及稀有等位基因的檢測(cè)。數(shù)字PCR的工作原理在于將DNA或cDNA樣品分割為許多單獨(dú)、平行的PCR反應(yīng)，部分這些反應(yīng)包含了靶標(biāo)分子（陽(yáng)性），而其他不包含（陰性）。單個(gè)分子可以被擴(kuò)增一百萬(wàn)倍或更多。在擴(kuò)增期間，TaqMan化學(xué)試劑及染料標(biāo)記探針可用于檢測(cè)特定序列的靶標(biāo)。當(dāng)不存在任何靶標(biāo)序列時(shí)，沒(méi)有信號(hào)累積。PCR分析后，陰性反應(yīng)片段用于生成樣品中靶標(biāo)分子的一致計(jì)數(shù)，而無(wú)需標(biāo)準(zhǔn)品或內(nèi)標(biāo)。

 

　　功能/主要應(yīng)用：                                                                 

　　1、微滴式數(shù)字PCR儀采用一種全新的方式進(jìn)行核酸分子的定量，與傳統(tǒng)PCR、定量PCR相比，其結(jié)果的精確度、準(zhǔn)確性和靈敏度更加。其定量的結(jié)果不再依賴于Cq值而直接給出靶序列的起始拷貝數(shù)濃度，實(shí)現(xiàn)真正意義上的絕對(duì)定量。

　　2、主要應(yīng)用于疾病相關(guān)分子標(biāo)記物檢測(cè)，稀有突變序列檢測(cè)，病原微生物檢測(cè)，食品安全及轉(zhuǎn)基因成分檢測(cè)，拷貝數(shù)變異遺傳分析，基因表達(dá)分析等。

 

　　影響微滴式數(shù)字PCR儀的控制因素：

　　1、微滴式數(shù)字PCR儀之間的差別對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。沒(méi)有任何兩臺(tái)PCR儀器的溫度控制是一模一樣的。相對(duì)于預(yù)設(shè)的溫度模塊溫度總是偏高或偏低，就是同一模塊不同的孔之間，溫度有時(shí)也會(huì)不一樣，相差可能達(dá)幾攝氏度之多。一些PCR儀溫度控制性能的不足造成的后果是：當(dāng)PCR儀的模塊溫度在升溫時(shí)，溫度過(guò)沖或不足，不能準(zhǔn)確的達(dá)到預(yù)設(shè)的平臺(tái)溫度。

　　2、溫度控制技術(shù)的差別對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。導(dǎo)致PCR儀溫度控制性能優(yōu)劣的因素，首先是溫度控制技術(shù)。調(diào)節(jié)PCR儀模塊的溫度，使其達(dá)到并保持在某一溫度有很多方式。每一種方式都有優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。另外，這些技術(shù)被運(yùn)用控制的水平對(duì)于溫度控制的水準(zhǔn)是很重要的，且有很大不同。大多數(shù)微滴式數(shù)字PCR儀的溫度控制性能是很差的。在單一或多傳感器控制機(jī)制上的不同顯而易見(jiàn)的引起了溫度的不均一性。

　　3、儀器老化對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。雖然PCR儀沒(méi)有任何的機(jī)械或可移動(dòng)部件，但是那并不意味著它不會(huì)磨損。電子器件的性能會(huì)隨著時(shí)間的延長(zhǎng)而老化，并由于過(guò)度的使用而加速老化。Peltier器件的失效或磨損會(huì)引起模塊的熱斑或冷斑，通常PCR儀器不能識(shí)別這種由于機(jī)械磨損，模塊延展和收縮效應(yīng)引起的溫控性能的不同。因此，為掌握這些情況，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR儀的溫度控制性能是重要的。出于同樣的原因，PCR儀溫控性能的失常通常是實(shí)驗(yàn)失敗或毀壞循環(huán)反應(yīng)的重要原因。